Cette ressource numérique est un article scientifique publié dans Nature Methods, portant sur la microscopie biphotonique en tissu profond. La microscopie biphotonique est une technique spécialisée d'imagerie par fluorescence qui excelle dans l'imagerie en profondeur au sein de tissus biologiques diffusants, un avantage majeur par rapport à la microscopie confocale ou à champ large conventionnelle. L'article propose une revue détaillée des principes, des avantages et des applications de cette modalité d'imagerie avancée. Il explique comment la microscopie biphotonique surmonte les limites de la diffusion de la lumière dans les tissus biologiques en utilisant des longueurs d'onde d'excitation plus longues (généralement dans le proche infrarouge) et un processus d'excitation non linéaire, limitant l'excitation de la fluorescence au plan focal. Il en résulte une réduction de la phototoxicité et du photoblanchiment, permettant une pénétration plus profonde et une imagerie prolongée d'échantillons vivants. L'article aborde les paramètres clés influençant la profondeur d'imagerie, tels que la longueur d'onde d'excitation et les propriétés optiques des tissus. Les chercheurs en neurosciences, en biologie du développement et en oncologie utilisent largement la microscopie biphotonique en tissu profond pour l'imagerie in vivo de la dynamique cellulaire, de l'activité neuronale et du microenvironnement tumoral. Cette technique permet une imagerie à haute résolution à plusieurs centaines de micromètres de profondeur chez l'animal vivant, fournissant des données cruciales sur des processus biologiques complexes dans leur contexte natif. L'article aborde également des aspects avancés comme l'optique adaptative pour la correction des aberrations, les systèmes laser spécialisés (ex. lasers à fibre dopée à l'ytterbium) et l'utilisation de fluorophores optimisés pour l'excitation biphotonique. Il constitue un guide précieux pour les chercheurs souhaitant mettre en place ou optimiser des expériences d'imagerie en tissu profond, en offrant des considérations pratiques pour obtenir des résultats fiables et reproductibles dans des systèmes biologiques complexes.