Module d'imagerie par mesure de durée de vie de fluorescence (FLIM)

La fluorescence est un processus cyclique où la durée de vie du fluorophore dépend non seulement des propriétés de la molécule elle-même, mais également de son environnement. Dans une situation comme le transfert d'énergie par résonance de fluorescence (FRET), la durée de vie de la molécule donneuse est raccourcie. Le FLIM peut donc être utilisé pour mesurer les interactions moléculaires. Contrairement aux analyses FRET conventionnelles, la mesure FLIM n'est pas sujette au photoblanchiment de la fluorescence ni aux variations de concentration, qui sont difficiles à contrôler dans les cellules vivantes.

Le module FLIM est un accessoire du système Zeiss NLO 510 qui utilise la technique de comptage de photons uniques corrélés en temps pour établir les courbes de déclin du fluorophore dans chaque pixel de l'image. Le système est équipé d'un détecteur à galette de microcanaux Hamamatsu RS-39, d'une roue à filtres et d'une carte de comptage de photons SPC730 de Becker Hickl (www.becker-hickl.de) pour le comptage de photons. Le système fait appel à une photodiode pour obtenir les données de synchronisation à partir des impulsions laser afin d'établir la courbe de déclin de fluorescence.

La principale application biologique de ce montage est l'analyse FRET, où la durée de vie du donneur peut être mesurée à la fois en présence et en absence de molécules acceptrices. L'efficacité de transfert FRET peut ensuite être calculée selon la formule suivante :
-Et =1- t D,A/ tD

Où t D,A correspond à la durée de vie de la molécule donneuse en présence de l'accepteur et t D à la durée de vie des molécules donneuses en l'absence de l'accepteur.

Le système fait partie intégrante du microscope multiphotonique. La préparation des échantillons ne nécessite aucune exigence particulière, si ce n'est qu'ils doivent convenir à l'observation confocale. Comme pour toute analyse FRET, tous les échantillons témoins sont requis (p. ex. donneur seul, accepteur seul, donneur et accepteur combinés, et échantillon sans aucun marquage pour l'autofluorescence).
L'interface du système n'est pas particulièrement conviviale. Il est offert uniquement en service assisté. Veuillez contacter le personnel pour obtenir plus de détails.

Référence : http://www.graduate-studies-in-cancer-research.org/CIF/CIFequip7.htm