Gladstone Institutes
Flow Cytometry Core
Sort cells on up to 18 colors or run large spectral panels, with the staff or on your own.
Traduit de l'anglais
1650 Owens Street, San Francisco, CA 94158
La plateforme
La plateforme de cytométrie en flux analyse et isole les cellules selon leur phénotype ou leur fonction. Triez jusqu'à 18 couleurs fluorescentes, en vrac ou à raison d'une cellule par puits, ou lisez de grands panels dans un seul tube sur l'analyseur spectral.
Il existe deux façons de travailler avec la plateforme. Confiez vos échantillons au personnel, qui peut les marquer, les passer et analyser les données. Ou suivez une formation avec l'équipe et utilisez vous-même les analyseurs et les trieurs, y compris en dehors des heures d'ouverture, une fois que vous avez démontré votre capacité à faire fonctionner, entretenir et dépanner l'appareil.
Le personnel conçoit les expériences et les panels d'anticorps avec vous, et la plateforme peut collaborer avec les autres plateformes de Gladstone pour former un pipeline unifié d'étude des cellules.
Ce que vous pouvez mesurer
Tri cellulaire. Jusqu'à 18 paramètres de fluorescence sur cinq lasers : 355, 405, 488, 561 et 640 nm. Tri global, cellule unique et tri indexé dans des tubes, plaques de 12 à 384 puits, plaques Terasaki ou lames. Tri de cellules uniques en plaques 96 puits pour le clonage ou le séquençage. Tri aseptique disponible.
Analyse. Marqueurs de surface, intracellulaires et fonctionnels ainsi que protéines fluorescentes, incluant phospho-flow, cycle cellulaire et tests mitochondriaux. Trois analyseurs prennent en charge les plaques de 96 et 384 puits.
Cytométrie en flux par imagerie. Une image de chaque cellule à 20x, 40x ou 60x, pour la colocalisation, l'internalisation, le cycle cellulaire et la mitose, la signalisation, les changements morphologiques et la translocation nucléaire.
Nanoparticules. Taille, concentration et fluorescence de particules individuelles d'environ 40 nm à 1 micron : vésicules extracellulaires, mitochondries, bactéries, virus et nanoparticules synthétiques.
Pluripotence des cellules iPS. Un panel de marqueurs pour vérifier la pluripotence de vos cellules iPS humaines, avec des résultats en une journée environ.
Avant d'apporter vos échantillons
Une suspension unicellulaire. Toutes cellules entre 500 nm et 20 µm, dans des tubes Falcon de 5 ou 15 ml, des tubes Eppendorf, des plaques multipuits ou sur des lames.
Jusqu'à 5 millions de cellules par ml dans du PBS ou du milieu. Maintenez le sérum à 2 % ou moins : une concentration supérieure peut altérer la charge du flux. L'HEPES (25 mM), l'EDTA (1 mM) ou la DNase (10 U/ml) empêchent les cellules de s'agréger. Filtrez sur un tamis cellulaire et apportez du milieu supplémentaire si l'échantillon doit être dilué.
Une copie de vos données. La plateforme enregistre une copie de vos fichiers FCS sur un serveur interne.
Travaux scientifiques réalisés sur la plateforme
Les articles ayant utilisé la plateforme couvrent la latence du VIH, la maladie d'Alzheimer, le vieillissement et les cellules souches. Quelques exemples :
In vivo chimeric Alzheimer's disease modeling of apolipoprotein E4 toxicity in human neurons. Cell Reports, 2020.
SIRT1 is downregulated by autophagy in senescence and ageing. Nature Cell Biology, 2020.
FOXO1 promotes HIV latency by suppressing ER stress in T cells. Nature Microbiology, 2020.
A molecular mechanism for probabilistic bet hedging and its role in viral latency. PNAS, 2020.
L'onglet Publications en répertorie d'autres, chacun avec le service utilisé.
Démarrer un projet
Choisissez un service et cliquez sur Demander un service. Précisez vos types de cellules et ce que vous souhaitez détecter ou isoler. Le personnel communiquera avec vous pour planifier l'analyse et vous transmettre un devis.
Pour utiliser les instruments vous-même, cliquez sur Demander une formation sur l'un d'eux. Vous devez lire et signer les règlements généraux de la plateforme, répondre à un court questionnaire sur votre expérience, puis suivre la formation sur l'instrument.
Plaques ou tubes. L'Aurora, le LSRFortessa X-20 et l'Attune NxT lisent tous les plaques de 96 et 384 puits.
Contacter la plateforme
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Avant votre première utilisation
Nouvel utilisateur de la plateforme ? Écrivez au personnel avant de venir. La formation débute par les règles générales de la plateforme et un court questionnaire sur votre expérience en cytométrie en flux.